Candor公司|LowCross-Buffer/低交叉反應緩沖液說明書

Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應緩沖液說明書

LowCross-Buffer

低交叉反應緩沖液

HAMA-阻斷劑替代品

提高結果的可靠性

LowCross-Buffer^?能夠大限度的減少以下因素的干擾：

l 人抗鼠抗體（HAMA）

l 類風濕因子（RF）

l 基質效應

干擾通常是由人抗鼠抗體（HAMA），類風濕因子（RF）以及高含量的膽紅素，甘油三酯等引起的。這些干擾不可能*由HAMA阻斷劑處理。HAMA阻斷劑只對HAMA有效果,相比之下，LowCross-Buffer^?作為一種實驗緩沖液，它能夠有效地阻止包括由HAMA引起的大量干擾因素的影響，所以LowCross-Buffer^?可以作為HAMA阻斷劑的替代品。LowCross-Buffer^?有助于消除免疫分析中微弱或中等的親和交叉反應所帶來的干擾，就像一個"親和門衛"。范圍內的診斷和制藥公司利用LowCross-Buffer^?，成功地將各種干擾因素的影響降至低，成為有經濟效益的解決方法。LowCross-Buffer^?被廣泛地應用于酶聯免疫吸附試驗（ELISA），免疫印跡（Western Blotting），蛋白質芯片，免疫組織化學以及側向層析等檢測，此外，它在基于熒光磁珠的實驗和SPR（表面等離子諧振）實驗中也有應用。

對HAMA和類風濕因子有效：

在CE認證的酶聯免疫吸附試驗（HAMA-ELISA，medac，德國）中，LowCross-Buffer^?抗HAMA和類風濕因子干擾的效果已經被證實。實驗使用商業化的人源HAMA和RF陽性樣本 (in. vent diagnostic, Germany)進行。使用LowCross-Buffer和未用LowCross-Buffer得到的實驗結果如圖1所示。

Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應緩沖液說明書

即用型

LowCross-Buffer^?可用來替代標準的稀釋緩沖液或者抗體稀釋緩沖液。

防腐劑：含有0.1%的ProClin^? 300。

產品規格： 50ml   產品編號100 050

           125ml   產品編號100 125

           500ml   產品編號100 500

 LowCross-Buffer^?也有適用于生產試劑盒廠商的大包裝。

圖1：LowCross-Buffer^?可以將HAMA和RF陽性樣本的干擾降至實驗的背景水平范圍內 (<40ng/ml，根據HAMA-ELISA說明書）。

圖2：蛋白芯片分析中表面與檢測抗體的非特異性結合減少。使用LowCross-Buffer后使信噪比從3，4提高到17，3。（data from N. Dankbar, university of Münster)

圖3：兔血清中CRP 的ELISA實驗：LowCross-Buffer通過去除基質效應來提高實驗的靈敏度（carried out by A. Zellmer, CANDOR Bioscience).

ELISA實驗中，用兔血清作為底物，加入一定濃度的CRP（C反應蛋白）做出標準曲線。分別用PBS/BSA標準緩沖液和LowCross-Buffer稀釋兔血清。包被到ELISA板上，然后加入酶標二抗顯色。CRP的一個特性就是可以與許多蛋白結合。LowCross-Buffer可以降低CRP與兔血清的結合，提高酶標二抗與兔血清的結合效率，從而提高檢測結果的靈敏性。

圖4：Western blotting 檢測細胞角蛋白4,5,6（done by Dr. D. Sperling, MACHEREY-NAGEL, Düren).

這個圖比較了用LowCross-Buffer? 和 TTBS (Tween/Tris-buffered salt solution)檢測的差別。LowCross-Buffer? 可以*阻止非特異性結合。角質蛋白4,5,6 分子量在56 -60 kDa 之間。使用LowCross-Buffer?后可以很明顯得被檢測到。處理膜后，泳道1和1‘的檢測來源為肝細胞，泳道2和2‘為HeLa細胞。M為蛋白分子量標記，用品紅染色。印跡膜為硝酸纖維素膜。泳道1和2可以清晰的在56 -60 kDa 之間看到特異性條帶。在泳道1‘和2‘條帶很雜，背景值很高，條帶不特異，有雜蛋白的干擾。

圖5：LowCross-Buffer在抗豚鼠IgG的ELISA實驗中可以預防假陽性的集合降低假陽性的干擾。

(done by Dr. C. Specht, PARA Bioscience, Gronau).分別用PBS和LowCross-Buffer稀釋抗體，結果如圖所示。1-6和7-12是做的兩組平行實驗。

A1-12是特異性對照組：與樣本相似的抗原包被在孔板中，然后加入特異性一抗，酶標二抗。

H1-12是空白對照組：稀釋液代替樣本，然后加入特異性一抗和酶標二抗。

圖6：使用標準緩沖液PBS/BSA/Tween和LowCross-Buffer (Candor Bioscience GmbH, Weissensberg,Germany)的ELISA結果對比.

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用競爭法測一種實驗性治療蛋白藥物，這個蛋白藥物溶于人血清中，在這兩種實驗緩沖液中的稀釋比例為1:750。FDA規定的藥物安全性實驗的變異率不能超過15%。

圖7：LowCross-Buffer對HAMA活性影響的實驗數據

使用medac GmbH的HAMA-ELISA試劑盒  (Wedel, Germany)進行HAMA活性測試。LowCross-Buffer使所有血清樣本中的HAMA活性顯著降低至40 ng/ml的界限值以下。

圖8：使用HAMA-ELISA試劑盒中的實驗緩沖液（MEDAC，Vir-Dil）和不同類型的LowCross-Buffer測試類風濕血清的交叉結合反應性。交叉反應可能會導致免疫診斷中不正確的結果。LowCross-Buffer的所有類型都可通過交叉反應的親和力的不同來阻止類風濕因子和實驗抗體的不需要的結合，實驗抗體和分析物的結合親和力較高。

圖9：側向層析實驗中，血清稀釋緩沖液LowCross-Buffer? STRONG(CANDOR Bioscience GmbH, Wei?ensberg)增加了抗新蝶呤抗體對血清中新蝶呤的敏感性。這個是實驗檢測病人血液中抗新蝶呤抗體的靈敏性高低的。這個競爭性的側向層析實驗試劑盒來自8sens.biognostic GmbH, Berlin。減少示蹤抗體的量對提高競爭性實驗的敏感性是非常重要的。

 Candor|LowCross-Buffer/低交叉反應緩沖液使用說明：

可用于ELISA、EIA、RIA、 Western blotting、免疫-PCR、蛋白芯片、多分析物免疫測定和免疫組化分析實驗，具體應用取決于檢測類型和使用的抗體性質。

LowCross-Buffer^?可以替代免疫反應中的標準樣品緩沖液或抗體稀釋緩沖液。

 1.ELISA: 樣本和檢測抗體的稀釋緩沖液。

 2. Western blotting: 一抗和二抗的稀釋緩沖液。

 3. 免疫組化分析: 一抗和二抗的稀釋緩沖液。

4. 蛋白芯片: 樣本和檢測抗體的稀釋緩沖液。

ELISA和蛋白芯片中樣本或者標準品可用LowCross-Buffer^?按1:2稀釋或者更高的稀釋比例。

LowCross-Buffer^?還可以用來作為洗滌緩沖液– 尤其是競爭性或者高靈敏性實驗，如免疫PCR。使用之前請立即混勻。

 注意事項：

標準品和樣本要嚴格按照相同的方式處理。

抗體用LowCross-Buffer^?稀釋時，需要按照抗體說明書推薦的濃度進行，一抗和二抗也是如此。

LowCross-Buffer^?不適用于作電泳緩沖液。

LowCross-Buffer^?不適用于作表面封閉液。表面封閉液推薦使用The Blocking Solution (訂購編號110 050，110 125，110 500)。

在某些情況下檢測信號會變弱。LowCross-Buffer^?可以減少親和力低或者中等親和性的結合。如果使用親和性低或者中等親和性的檢測抗體或者多克隆抗體，檢測信號就會減弱，因為多克隆抗體通常含有低或者中等親和性的結合成份。在這種情況下適當地增加多克隆抗體的濃度可以增強檢測信號。

雖然LowCross-Buffer?可用作實驗緩沖液，但是ELISA微孔表面以及Western Blotting的膜表面還是需要用封閉液進行封閉。我們推薦使用The Blocking Solution (訂購編號：110 050，110 125，110 500)。

免疫實驗的組份，包括LowCross-Buffer^?的成份可能會終止某些熒光染料的熒光。我們推薦使用Oyster*- (Denovo Biolabels), CyDye**-(Amersham)或者Alexa***- (分子探針) 作為熒光染料。

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